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质粒大提程序

1) 200mL含有50mg/mL氨苄或30mg/mL卡纳的培养基中振摇过夜（12-14h）
2) 50mL离心管，4℃，4000rpm,10min收集2份细胞
3) 每管加5mLSTE悬浮细胞后，4℃，4000rpm,10min收集细胞，置-20℃贮存10min
4) 室温解冻后，每管加4mL冰预冷的溶液Ⅰ，重悬细胞
5) 室温下每管加8mL溶液Ⅱ后充分混匀，室温静置5-10min
6) 每管加6mL冰预冷的溶液Ⅲ，充分混匀，冰浴静置10min
7) 4℃，11000rpm,30min收集裂解上清液（用纱布过滤）
8) 每管加0.6倍体积异丙醇，室温静置10min
9) 4℃，8000rpm,15min收集核酸沉淀，每管加5mL70%乙醇清洗
10) 4℃，8000rpm,5min收集沉淀，晾10-15min，直至管壁无液滴
11) 每管加2mLTE溶解核酸，4℃或冰浴静置30min
12) 每管加2mL7.5mol/L乙酸铵溶液，冰浴静置10min
13) 4℃，10000rpm,10min收集上清，每管加4mL异丙醇，混匀
14) 4℃，10000rpm,10min收集沉淀，4-5mL70%乙醇清洗沉淀
15) 4℃，10000rpm,5min收集沉淀，晾10-15min，直至管壁无液滴
16) 每管加1mLTE溶解核酸，4℃或冰浴静置30min
17) 两份溶液和到一管，加8μL10mg/mLRNase A，混匀转入EP管（每管转入500μL），37℃水浴静置30-60min
18) 每管加250μL酚，250μL仿醇（24:1）抽提，4℃，12000rpm,10min，收集上清水相（aμL）
19) 每管加aμL仿醇（24:1）抽提，4℃，12000rpm,10min，收集上清水相（bμL）
20) 每管加2bμL-20℃乙醇和0.1bμL乙酸钠溶液，-20℃静置过夜
21) 4℃，12000rpm,10min收集沉淀，每管加200μL70%乙醇清洗
22) 4℃，12000rpm,5min收集沉淀，晾5-10min，直至管壁无液滴
23) 每管加10-15μLTE溶解沉淀，合并到一个EP管中，保存于-20℃冰箱中