中科新闻网高清燕尾型材成品图:利用吸附柱纯化DNA的原理是什么？
来源：百度文库 编辑：中科新闻网 时间：2024/05/06 07:59:21
看了楼上一些回答，也是学生命类的吧？
专一性的吸附柱用的是和基因探针一样的原理，人工合成待纯化的DNA的一端一定长度序列的反义链，并加到吸附柱上，当混合物经过时，需要分离的DNA分子与柱上的探针结合，被留下，其余的通过。
这样的离心吸附柱可以高效、专一地与DNA片段结合,同时最大限度除去蛋白质、离子及引物小片段等杂质。
这样将寡核苷酸片断结合到柱上，可回收50 bp-50 kb DNA片段。适用于 DNA溶液中只有单一DNA片段或溶液中所有DNA片段都需同时回收的情况。
非专一性的和楼上说的差不多。
纯化柱是表面偶联有二乙胺乙醇(DEAE)的亲水性树脂.DNA纯化原理为DNA磷酸基带负电荷, DEAE带正电荷, DNA可以在0.1～1.4 mol．L-1的相当大的盐浓度范围内仍与DEAE 结合, 当低盐QBT溶液平衡纯化柱后, 即可加样, 用中等盐浓度的QC洗去RNA和其他杂质, 最后用高盐浓度的QF将DNA洗脱下来。
由于传统的离子交换范围仅在0.4 mol．L-1以内, 使杂质和DNA 洗脱范围十分接近, 难于达到满意的纯化效果. 但该柱一经使用, 6h后纯化效力即开始下降。估计可能得原因有二, 一是树脂表面亲水性强, 极易吸附蛋白, 糖类, RNA等水容物, 从而使原装柱经几次循环后吸附过多杂质, 影响了DEAE吸附DNA的能力, 同时杂质阻塞树脂间隙, 使液体流过柱子的速度明显变慢, 二是DEAE与树脂的偶联并不十分稳定, 在一经使用后的液体环境中,容易逐步解离.
dna本身是带负电的生物大分子，可以选择合适的ph值，使得dna带负电，其它杂质分子不带电或带正电，而吸附柱上携带正电的话，就可以吸附dna。